Expresión transitoria en plantas de Nicotiana benthamiana de las proteínas NSm y N del virus del bronceado del tomate (TSWV). Inducción y supresión del silenciamiento de RNA

Abstract

El virus del bronceado del tomate (Tomato spotted wilt virus, TSWV) está considerado como una de las virosis más destructivas de la agricultura actual, siendo capaz de infectar a una gran variedad de cultivos hortícolas, ornamentales y especies de malas hierbas. En España, la enfermedad del bronceado provoca grandes pérdidas económicas en los cultivos de tomate (Solanum lycopersicum), produciéndose la mayor incidencia en toda la zona mediterránea y en el archipiélago canario. El método de control más eficaz es el desarrollo de variedades con resistencia. La incorporación en cultivares de tomate del gen Sw-5, procedente de Lycopersicon peruvianum, supuso una disminución importante de las pérdidas económicas, debido a su amplio espectro de acción. Sin embargo, debido a la elevada diversidad y a la gran adaptabilidad de TSWV, han aparecido numerosos aislados que superan esa resistencia. Experimentos anteriores realizados in vitro permitieron localizar los determinantes genéticos responsables de la rotura de la resistencia en las posiciones aminoácidicas 118 y 120 de la proteína NSm. Para la demostración in vivo se ensayará si en plantas de tomate con el gen Sw-5 es posible observar multiplicación de un aislado que no supera la resistencia, expresando transitoriamente la proteína NSm de aislados que si la superan. Para ello, un objetivo del presente trabajo consistió en estudiar la cinética de expresión transitoria de diferentes proteínas de TSWV, en plantas de Nicotiana benthamiana, mediante agroinoculación de un vector viral derivado del virus X de la patata (PVX). Un segundo objetivo consistió en evaluar la posibilidad de activación del silenciamiento génico mediado por RNA, tras la posterior inoculación con un aislado de TSWV. Los ensayos de agroinoculación llevados a cabo con las diferentes construcciones mostraron la capacidad del vector para expresar las proteínas de TSWV e infectar sistémicamente plantas de N. benthamiana. Sin embargo, en un caso se observó que la construcción era inestable in planta, probablemente debido a fenómenos de recombinación homóloga. La inoculación posterior de esas mismas plantas con un aislado de TSWV provocó la activación del silenciamiento génico mediado por RNA, impidiendo la acumulación de TSWV. Sin embargo, al final de ensayo se observó infección sistémica por TSWV debido, posiblemente, a la rotura del silenciamiento como consecuencia de la expresión sistémica de la proteína supresora TGBp1 del PVX.