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Caracterización del modelo de ratón knock-in Irs2-GFP-Luc.

RiuNet: Institutional repository of the Polithecnic University of Valencia

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Caracterización del modelo de ratón knock-in Irs2-GFP-Luc.

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dc.contributor.advisor Rodrigo Bravo, Ismael es_ES
dc.contributor.advisor Irles Vidal, Esperanza es_ES
dc.contributor.advisor Burks, Deborah es_ES
dc.contributor.author Belda Silvestre, Carla es_ES
dc.date.accessioned 2021-09-07T08:17:12Z
dc.date.available 2021-09-07T08:17:12Z
dc.date.created 2021-07-22
dc.date.issued 2021-09-07 es_ES
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10251/171586
dc.description.abstract [ES] El sustrato del receptor de la insulina 2 (IRS2) es una proteína adaptadora citoplasmática esencial en las vías de señalización celular reguladas por el receptor de la insulina, el receptor del factor de crecimiento similar a la insulina y sus ligandos. Los ratones con deficiencia de IRS2 muestran un crecimiento cerebral alterado, subfertilidad y desarrollan progresivamente diabetes debido a una reducción de la masa de las células beta pancreáticas y al desarrollo de resistencia periférica a la insulina. Sin embargo, pese a ser esencial para el crecimiento y la función de los islotes, los niveles de expresión de IRS2 en el páncreas endocrino son relativamente bajos. Ello, sumado a la falta de herramientas adecuadas, ha dificultado históricamente el estudio de IRS2 en el páncreas endocrino en diferentes etapas del desarrollo o en condiciones patológicas. En este contexto, el grupo de la Dra. Burks ha generado un nuevo modelo murino reportero que permite monitorizar la expresión génica endógena in vivo e in vitro. El objetivo general del presente TFG era explorar varias técnicas para caracterizar la expresión de IRS2 en dicho modelo reportero de ratón. Empleando western blot se evaluó la expresión de IRS2 en los islotes pancreáticos y en el bazo mediante la detección de las proteínas reporteras GFP (Green Fluorescent Protein) y luciferasa. La expresión de IRS2 aumenta con la edad tanto en los islotes como en el bazo en el modelo reportero. Mediante citometría de flujo se observó que las células del páncreas que no expresan GFP/IRS2 son más proliferativas que las que sí expresan GFP/IRS2. Además, se han comenzado a establecer las condiciones técnicas óptimas para separar las células de los islotes GFP+ y GFP- del modelo reportero mediante citometría de tipo FACS, a la espera de confirmar si la estrategia de sorting utilizada es adecuada o no. es_ES
dc.description.abstract [EN] Insulin Receptor Substrate 2 (IRS2) is a cytoplasmic adaptor protein essential in cell signalling pathways governed by the insulin receptor, insulin-like growth factor receptor and their ligands. IRS2-deficient mice show impaired brain growth, subfertility, and progressively develop diabetes due to a reduction in pancreatic beta-cell mass and the development of peripheral insulin resistance. However, despite being essential for islet growth and function, IRS2 expression levels in the endocrine pancreas are relatively low and the lack of appropriate tools has historically hindered the study of IRS2 in the endocrine pancreas at different developmental stages or in pathological conditions. In this context, the group of Dr. Burks has generated a new murine reporter model allowing endogenous gene expression to be monitored in vivo and in vitro. The overall objective of the current TFG was to explore various techniques to characterize IRS2 expression in this mouse reporter model. Using western blot, IRS2 expression in pancreatic islets and spleen was assessed by detecting the GFP (Green Fluorescent Protein) and luciferase reporter proteins. IRS2 expression increases with age in both islets and spleen in the reporter model. Using flow cytometry, we observed that pancreas cells that do not express GFP/IRS2 are more proliferative than those that do express GFP/IRS2. We have also begun to establish the optimal technical conditions for separating GFP+ and GFP- islet cells from the reporter model by FACS-type cytometry, pending confirmation of whether the sorting strategy used is appropriate or not. es_ES
dc.format.extent 27 es_ES
dc.language Español es_ES
dc.publisher Universitat Politècnica de València es_ES
dc.rights Reconocimiento - No comercial - Sin obra derivada (by-nc-nd) es_ES
dc.subject IRS2 es_ES
dc.subject Diabetes es_ES
dc.subject Islotes pancreáticos es_ES
dc.subject GFP es_ES
dc.subject Luciferasa es_ES
dc.subject Bazo es_ES
dc.subject Pancreatic islets es_ES
dc.subject Luciferase es_ES
dc.subject Spleen es_ES
dc.subject.classification BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR es_ES
dc.subject.other Grado en Biotecnología-Grau en Biotecnologia es_ES
dc.title Caracterización del modelo de ratón knock-in Irs2-GFP-Luc. es_ES
dc.type Proyecto/Trabajo fin de carrera/grado es_ES
dc.rights.accessRights Abierto es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Departamento de Biotecnología - Departament de Biotecnologia es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural - Escola Tècnica Superior d'Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural es_ES
dc.description.bibliographicCitation Belda Silvestre, C. (2021). Caracterización del modelo de ratón knock-in Irs2-GFP-Luc. Universitat Politècnica de València. http://hdl.handle.net/10251/171586 es_ES
dc.description.accrualMethod TFGM es_ES
dc.relation.pasarela TFGM\144114 es_ES


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