Caracterización del modelo de ratón knock-in Irs2-GFP-Luc.

Abstract

[ES] El sustrato del receptor de la insulina 2 (IRS2) es una proteína adaptadora citoplasmática esencial en las vías de señalización celular reguladas por el receptor de la insulina, el receptor del factor de crecimiento similar a la insulina y sus ligandos. Los ratones con deficiencia de IRS2 muestran un crecimiento cerebral alterado, subfertilidad y desarrollan progresivamente diabetes debido a una reducción de la masa de las células beta pancreáticas y al desarrollo de resistencia periférica a la insulina. Sin embargo, pese a ser esencial para el crecimiento y la función de los islotes, los niveles de expresión de IRS2 en el páncreas endocrino son relativamente bajos. Ello, sumado a la falta de herramientas adecuadas, ha dificultado históricamente el estudio de IRS2 en el páncreas endocrino en diferentes etapas del desarrollo o en condiciones patológicas. En este contexto, el grupo de la Dra. Burks ha generado un nuevo modelo murino reportero que permite monitorizar la expresión génica endógena in vivo e in vitro. El objetivo general del presente TFG era explorar varias técnicas para caracterizar la expresión de IRS2 en dicho modelo reportero de ratón. Empleando western blot se evaluó la expresión de IRS2 en los islotes pancreáticos y en el bazo mediante la detección de las proteínas reporteras GFP (Green Fluorescent Protein) y luciferasa. La expresión de IRS2 aumenta con la edad tanto en los islotes como en el bazo en el modelo reportero. Mediante citometría de flujo se observó que las células del páncreas que no expresan GFP/IRS2 son más proliferativas que las que sí expresan GFP/IRS2. Además, se han comenzado a establecer las condiciones técnicas óptimas para separar las células de los islotes GFP+ y GFP- del modelo reportero mediante citometría de tipo FACS, a la espera de confirmar si la estrategia de sorting utilizada es adecuada o no.

[EN] Insulin Receptor Substrate 2 (IRS2) is a cytoplasmic adaptor protein essential in cell signalling pathways governed by the insulin receptor, insulin-like growth factor receptor and their ligands. IRS2-deficient mice show impaired brain growth, subfertility, and progressively develop diabetes due to a reduction in pancreatic beta-cell mass and the development of peripheral insulin resistance. However, despite being essential for islet growth and function, IRS2 expression levels in the endocrine pancreas are relatively low and the lack of appropriate tools has historically hindered the study of IRS2 in the endocrine pancreas at different developmental stages or in pathological conditions. In this context, the group of Dr. Burks has generated a new murine reporter model allowing endogenous gene expression to be monitored in vivo and in vitro. The overall objective of the current TFG was to explore various techniques to characterize IRS2 expression in this mouse reporter model. Using western blot, IRS2 expression in pancreatic islets and spleen was assessed by detecting the GFP (Green Fluorescent Protein) and luciferase reporter proteins. IRS2 expression increases with age in both islets and spleen in the reporter model. Using flow cytometry, we observed that pancreas cells that do not express GFP/IRS2 are more proliferative than those that do express GFP/IRS2. We have also begun to establish the optimal technical conditions for separating GFP+ and GFP- islet cells from the reporter model by FACS-type cytometry, pending confirmation of whether the sorting strategy used is appropriate or not.