Búsqueda de biomarcadores predictores de la respuesta a Ustekinumab en pacientes con enfermedad de Crohn. Caracterización de los perfiles de citoquinas

Abstract

[ES] La Enfermedad Inflamatoria Intestinal (EII) es un trastorno inflamatorio crónico debilitante del tracto gastrointestinal, en la cual clasificamos dos enfermedades principales: la colitis ulcerosa (CU) y la enfermedad de Crohn (EC). En los pacientes que sufren una EII, se produce una inflamación crónica y una producción excesiva de citoquinas proinflamatorias inducida por una respuesta por parte de las células T exagerada e intolerante. El presente trabajo se centra en los pacientes que sufren EC y en su respuesta al fármaco Ustekinumab, un fármaco biológico que se trata de un anticuerpo monoclonal dirigido contra la subunidad p40, compartida por las citoquinas proinflamatorias interleuquina (IL) IL-12 y IL-23, por lo tanto, previene la interacción de estas citoquinas con el receptor presente en la superficie de las células T, impidiendo su activación. El objetivo principal es analizar los perfiles de citoquinas de los pacientes tratados con Ustekinumab durante el periodo de inducción, y la búsqueda de biomarcadores predictores de respuesta. El objetivo secundario es realizar un estudio preliminar sobre las poblaciones celulares inmunitarias en pacientes con EC activa en tratamiento con Ustekinumab y controles sanos, mediante citometría de flujo. Para ello, se llevó a cabo la medición de la concentración de las citoquinas en muestras de suero sanguíneo en la semana 0, semana 8 y semana 16 de los pacientes con EC tratados con Ustekinumab, mediante un ensayo multiplex en Luminex® y realizando el análisis con el sistema MAGPIX® para el estudio de las citoquinas interleuquina (IL) IL-10, IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-12p70, IL-13, IL-17, IL-2, IL-23, IL-7, interferón gamma (IFNgamma), factor de necrosis tumoral alfa (TNFalfa) y oncostatina M (OSM). Para realizar el análisis los pacientes se clasificaron según su respuesta al fármaco en tres grupos: remisión, respuesta parcial o no respuesta, gracias parámetros bioquímicos y clínicos. Los datos se analizaron mediante el test estadístico Kruskal-Wallis y la predicción de respuesta mediante el análisis de regresión logística. Por otro lado, para analizar las poblaciones celulares inmunitarias se han empleado muestras de plasma sanguíneo mediante citometría de flujo, analizadas gracias al proframa Infinicyt. Los resultados obtenidos indican que tras la administración de la pirmera dosis sí hay un efecto diferente sobre el nivel de determinadas citoquinas en los pacientes que sí responden al fármaco frente a los que no. Además, se han identificado la IL-17, IL-23 y el IFNgamma como factores independientes que influyen a la respuesta (p<0,05) y que resultan ser variables predictoras.

[EN] Inflammatory Bowel Disease (IBD) is a debilitating chronic inflammatory disorder of the gastrointestinal tract, in which we classify two main diseases: ulcerative colitis (UC) and Crohn's disease (CD). In patients with IBD, there is chronic inflammation and excessive production of proinflammatory cytokines induced by an exaggerated and intolerant T-cell response. In the present work we are going to focus on patients suffering from CD and their response to the drug Ustekinumab, a biological drug which is a monoclonal antibody directed against the p40 subunit, shared by the proinflammatory cytokines interleukin (IL) IL-12 and IL-23, thus preventing the interaction of these cytokines with the receptor present on the surface of T cells, and their activation. The main objective is to analyze the cytokine profiles of patients treated with Ustekinumab during the induction period, and the search for predictive biomarkers of response. The secondary objective is to carry out a preliminary study on the immune cell populations in patients with active CD treated with Ustekinumab and healthy controls, by flow cytometry. For this, the cytokines¿ concentration was measured in blood serum samples at week 0, week 8 and week 16 of patients with CD treated with Ustekinumab, using a multiplex assay in Luminex® and performing the analysis with the MAGPIX® system for the study of interleukin (IL) cytokines IL-10, IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-12p70, IL-13, IL-17, IL-2, IL-23 , IL-7, interferon gamma (IFgamma), tumor necrosis factor alpha (TNFalpha), and oncostatin M (OSM). To carry out the analysis, the patients were classified according to their response to the drug into three groups: remission, partial response, or no response, thanks to biochemical and clinical parameters. Results were analyzed using the Kruskal-Wallis statistical test and the response prediction was done using logistic regression analysis. On the other hand, to analyze immune cell populations, blood plasma samples were studied by flow cytometry and analyzed with the programme Infinicyt. The results obtained suggest that there is a different effect on the concentration of some cytokines in patients who do respond to the drug compared to those who do not, thanks to the administration of the first dose, and in addition, IL-17, IL- 23 and IFNgamma are independent factors that influence the response (p<0.05) that turn out to be predictor variables.