Efecto de la presencia de Ficoll-70 o dextrano-70 en el medio de congelación de semen de conejo en su calidad y capacidad fecundante

Abstract

[ES] La elección de los componentes de los medios de congelación, entre ellos los crioprotectores, influye decisivamente en la supervivencia y funcionalidad de los espermatozoides. Los principales crioprotectores utilizados actualmente para la crioconservación de semen de conejo son una combinación de permeables, como la acetamida o el dimetilsulfóxido y no permeables, como la lactosa, sacarosa, rafinosa, trehalosa, y más recientemente el dextrano. La mayoría de los estudios analizan únicamente los efectos in vitro de los diferentes medios de congelación, por lo que existe poca información sobre sus efectos sobre la fertilidad y prolificidad de la hembra. En este contexto, el objetivo de este estudio es evaluar la acción protectora del dimetilsulfóxido en combinación con dos polisacáridos, de igual peso molecular pero distinta conformación espacial, el ficoll-70 y el dextrano-70, sobre diferentes parámetros de calidad seminal in vitro y a su capacidad fecundante in vivo. Para ello, la motilidad de los espermatozoides fue evaluada mediante un sistema de análisis espermático asistido por ordenador (CASA), la integridad de las membranas y la viabilidad de los espermatozoides se midió mediante citometría de flujo y la sensibilidad a la capacitación se estudió mediante un test biológico con co-cultivo de células oviductales en el que se observó el número de espermatozoides adheridos a la placa por cm2. Por último, la capacidad fecundante in vivo de los espermatozoides congelados se evaluó mediante inseminación artificial, obteniéndose al parto la tasa de fertilidad (número de hembras paridas/número de hembras inseminadas) y la prolificidad (número de crías totales y vivas nacidas). Tras la evaluación tanto in vivo como in vitro no se detectaron diferencias entre ambas macromoléculas en los parámetros de seminales de viabilidad total, daños en acrosoma, motilidad total y progresiva tras la congelación, ni en la tasa de fertilidad y prolificidad tras la inseminación. En cuanto al test biológico, los espermatozoides congelados con dextrano tuvieron mayor capacidad de adherencia al epitelio oviductal reconstruido, lo que podría sugerir que el dextrano y el ficoll interaccionan o conservan de modo diferencial la membrana espermática, sin embargo, esta diferencia no se ve reflejada en los resultados in vivo. Por lo que ambas macromoléculas contribuyen de manera similar en el proceso de congelación- descongelación del semen.

[EN] The selection of freezing media components, including cryoprotectants, has a decisive influence on the survival and functionality of the spermatozoa. The main cryoprotectants currently used for rabbit sperm cryopreservation are a combination of permeable, such as acetamide or dimethyl sulfoxide, and non-permeable, such as lactose, sucrose, raffinose, trehalose, and more recently dextran. Most studies only analyse the in vitro effects of the different freezing media, so there is little information on their effects on female fertility and prolificacy. In this context, the purpose of this study is to evaluate the protective action of dimethyl sulfoxide in combination with two polysaccharides of equal molecular weight but different spatial conformation, ficoll-70 and dextran-70, on different parameters of seminal quality in vitro and their fertilising ability in vivo. For this purpose, sperm motility was evaluated using a computer- assisted sperm analysis (CASA) system, membrane integrity and sperm viability were measured by flow cytometry and capacitation sensitivity was studied by a biological test with co-culture of oviductal cells in which the number of spermatozoa adhering to the plate per cm2 was observed. Finally, the fertilising ability of the frozen spermatozoa was evaluated by artificial insemination, obtaining the fertility rate at birth (number of females giving birth/number of females inseminated) and prolificacy (number of total and live kits born). After both in vivo and in vitro evaluation, no differences were detected between both macromolecules in the seminal parameters of total viability, damaged acrosome membrane, total and progressive motility, and neither in fertility rate and prolificacy at birth after artificial insemination of does. In terms of the biological test, sperm frozen with dextran had a greater capacity to adhere to the reconstructed oviductal epithelium, which could suggest that dextran and ficoll differentially interact or preserve the sperm membrane, however, this difference is not reflected in the in vivo results. Therefore, both macromolecules contributed equivalently to sperm cryoprotection in the freezing-thawing process.