Caracterización del dominio transmembrana del receptor de neurotrofinas TrkB

Abstract

[ES] La familia de receptores tirosina quinasas (TRK) son cruciales en el proceso de desarrollo del sistema nervioso. El mecanismo molecular de activación del receptor TrkB tras la unión de su ligando específico el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) sigue sin estar resuelto. Resultados recientes en su homólogo TrkA sugieren la existencia de un equilibrio entre el monómero y el dímero previa a la unión de NGF, y que la unión del ligando estabiliza la conformación de dímero activo del receptor. En este trabajo nos planteamos cuál es el papel del dominio transmembrana de TrkB (TMD) en la activación del receptor y su dimerización. Mediante técnicas de mutagénesis dirigida por PCR en el TMD de TrkB, diseñaremos construcciones que permiten identificar de forma puntual los residuos que podrían constituir la interfaz del dímero activo del receptor. Por otro lado, ensayos de Western Blot, citometría de flujo y diferenciación celular nos aportan información sobre los niveles de expresión y actividad del receptor. Estos estudios permitirán validar la estructura del dímero del TMD de TrkB obtenida mediante NMR por colaboradores del grupo receptor.

[EN] Tyrosine kinase receptors (TRK) are essential for the development of the nervous system. The molecular mechanism of TrkB activation through the binding of its specific ligand the brain-derived growth factor (BDNF) remains still unresolved. Recent results for its homologous, TrkA, suggest that an equilibrium behavior exists between a monomeric and a dimeric stage before the binding of its ligand, and this binding stabilizes the active dimer conformation of the receptor. In this project, we study what the role of the transmembrane domain (TMD) of TrkB really is when it comes to the activation of the receptor and its dimerization. Using PCR site-directed mutagenesis in the TMD of TrkB, we design constructions that allow us to identify specifically aminoacidic residues that could compose the interface in the receptor¿s active dimer. Moreover, Western Blot, Flow Cytometry and cell differentiation assays provide information about the receptor¿s expression levels and activity. These studies will allow the validation of the structure of TrkB-TMD homodimers obtained by NMR by collaborators of the hosting laboratory.