Role of PLCB3 in adipogenesis

Abstract

[EN] Obesity is a medical condition associated with a higher risk of metabolic and cardiovascular complications, known as comorbidities. Around 15-45% of obese individuals are not affected by this kind of complications, the so-called metabolically healthy obese (MHO). In contrast, around 6-30% of the lean individuals present comorbidities comparable to the ones from obese patients, known as metabolically obese normal weight (MONW). In order to elucidate the biology underlying these paradoxical phenotypes, our research group has previously performed a genome wide association study (GWAS) to identify novel genes that predispose to obesity but paradoxically have protective effects on cardiometabolic health identifying over 60 adiposity-increasing loci with protective cardiometabolic effects. One of the genes found was PLCB3 associated with one two trait-pair (BMI-TG and BMI-HDL). Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase beta-3 is an enzyme encoded by the PLCB3 gene. It catalyses the formation of inositol 1,4,5-trisphosphate and diacylglycerol from phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate. Genetic variants in PLCB3 gene have recently been identified as possibly regulating lipid homeostasis and body fat distribution in relation to adipose tissue expandability capability. Given all these evidences, in this work, the role of PLCB3 in the differentiation process from preadipocytes to mature adipocytes of the murine adipocyte 3T3L1 cell line. Frist of all we will profile the mRNA and protein level of this gene during differentiation in physiological conditions. Then PLCB3 depletion in 3T3L1 cell lines will be performed using a lentiviral siRNA approach. The cells will be differentiated into mature adipocytes. At different stages of differentiation, molecular analysis will be carried out by qPCR and immunoblot and morphological analysis by immunofluorescence.

[ES] La obesidad es una condición médica asociada con un mayor riesgo de complicaciones metabólicas y cardiovasculares, conocidas como comorbilidades. Alrededor del 15-45% de las personas obesas no se ven afectadas por este tipo de complicaciones, los llamados obesos metabólicamente sanos (MHO). Por el contrario, alrededor del 6-30% de las personas delgadas presentan comorbilidades comparables a las de los pacientes obesos, conocidas como peso normal metabólicamente obeso (MONW). Para dilucidar la biología subyacente a estos fenotipos paradójicos, nuestro grupo de investigación realizó previamente un estudio de asociación de todo el genoma (GWAS) para identificar nuevos genes que predisponen a la obesidad pero que, paradójicamente, tienen efectos protectores sobre la salud cardiometabólica, identificando más de 60 loci que aumentan la adiposidad con funciones protectoras. efectos cardiometabólicos. Uno de los genes encontrados fue PLCB3 asociado con dos pares de rasgos (BMI-TG y BMI-HDL). La fosfatidilinositol-4,5-bifosfato fosfodiesterasa beta-3 es una enzima codificada por el gen PLCB3. Cataliza la formación de inositol 1,4,5-trifosfato y diacilglicerol a partir de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato. Recientemente se han identificado variantes genéticas en el gen PLCB3 que posiblemente regulan la homeostasis de los lípidos y la distribución de la grasa corporal en relación con la capacidad de expansión del tejido adiposo. Dadas todas estas evidencias, en este trabajo se analiza el papel de PLCB3 en el proceso de diferenciación de preadipocitos a adipocitos maduros de la línea celular de adipocitos murinos 3T3L1. En primer lugar, perfilaremos el nivel de ARNm y proteína de este gen durante la diferenciación en condiciones fisiológicas. Luego, se realizará el agotamiento de PLCB3 en líneas celulares 3T3L1 utilizando un enfoque lentiviral de ARNip. Las células se diferenciarán en adipocitos maduros. En las diferentes etapas de diferenciación se realizarán análisis moleculares mediante qPCR e inmunoblot y análisis morfológico mediante inmunofluorescencia.