Efecto de la albúmina sérica bovina sobre la capacitación del semen de conejo

Abstract

[ES] Se ha observado que la albúmina es un posible inductor de la capacitación espermática en mamíferos, debido a sus propiedades como solubilizante lípidos y como aceptor de esteroles. En este proyecto, el objetivo fue valorar el efecto capacitante de la albúmina sérica bovina sobre el semen del conejo con el fin de obtener un procedimiento de fecundación in vitro en dicha especie. Para ello, se llevaron a cabo 3 experimentos. En primer lugar, se evaluó el efecto de dos tipos de albúmina sérica, la BSA (albúmina sérica bovina) y BSA libre de ácidos grasos en una solución salina de Tyrode (TALP) sobre los espermatozoides a diferentes tiempos de incubación (2 y 4 horas). Los resultados sugerían que los medios TALP con BSA con independencia del tiempo de incubación modifican los patrones de movimiento, incrementando la frecuencia de la subpoblación espermática con signos de capacitación. En segundo experimento, se evaluó el medio TALP-BSA asociado a tres tratamientos, selección en gradiente(A), dilución del semen (B) y doble centrifugación del semen(C). Al finalizar el tratamiento, se indujo la reacción acrosómica con el ionóforo de calcio A23187. En este experimento, los espermatozoides tratados con ionóforo alteraron sus patrones de movimiento como consecuencia de un incremento en su capacidad de adherencia, probablemente debido a la reacción acrosómica inducida. El 64,4% de los espermatozoides del tratamiento con doble centrifugación pertenecían a la subpoblación que presentaba signos evidentes de reacción acrosómica. Finalmente, en el tercer experimento, se comprobó la capacidad fecundante de los espermatozoides mediante co-cultivo de óvulos en MII y espermatozoides tratados. Tras el cultivo, los espermatozoides tratados con una doble centrifugación alcanzaron la mayor tasa tanto de fecundación (51,6%) como de desarrollo a mórula o blastocisto temprano a las 96 horas de cultivo (40,3%). Los resultados de estos experimentos demostraron que el uso de la albúmina sérica bovina, en combinación con solución TALP y una doble centrifugación, tienen un efecto capacitante sobre los espermatozoides de conejo. Sin embargo, esta capacitación es insuficiente para lograr tasas elevadas de fecundación in vitro en esta especie.

[EN] It has been observed that bovine serum albumin is a potential inductor of sperm capacitation in mammals due to its properties as a lipid solubilizer and sterol acceptor. In this project, the objective was to determine the capacitating effect of the bovine serum albumin in rabbit semen with the purpose of obtaining an in vitro fertilization proceeding in the mentioned species. For this, three different experiments were carried out. In the first place, in a Tyrode saline solution (TALP), the effect on sperm of two different types of BSA: the BSA (Bovine serum albumin) and the fatty acids free BSA, at different incubation times (2 and 4 hours) was assessed. This experiment demonstrated that the common BSA offered better capacitating results over rabbit sperm on the BSA-FV, increasing the subpopulation that showed capacitation signs. The incubation times did not affect. In the second experience, three different treatments were assessed with the TALP-BSA medium: sperm selection (A), sperm dilution (B) and semen double centrifugation (C). At the end of the treatment, acrosomic reaction was induced with calcium ionophore A23187 in order to evaluate the in vitro capacitation. In this experiment, was observed that the ionophore altered the sperm motile patterns, as a result of an increase in their adherence capability, probably due to an inducted acrosomic reaction. 64.4% of sperm treatment with double centrifugation belonged to the subpopulation that showed obvious signs of acrosome reaction. Finally, in the third experiment, the fertilizing capacity of sperm by co-culture of oocytes in MII and treated sperm was ascertained. After culture, sperm treated with a double centrifugation reached both the highest fertilization rate (51.6%) and development to morula or early blastocyst at 96 hours of culture (40.3%). The results of these experiments demonstrated that the use of bovine serum albumin in combination with TALP solution and centrifuging twice, have effect on sperm capacitation rabbit. However, this training is insufficient to achieve high rates of in vitro fertilization in this species.