Effect of male on the aminopeptidase activity in rabbit seminal plasma

Abstract

[EN] Since ovulation in rabbit is induced by sensory stimulation associated with mating, an effective control of ovulation is required in the artificial insemination process. The intramuscular application of GnRH analogues is the most common practice in rabbit reproductive management; however, the process can be simplified replacing the intramuscular application by the addition of the GnRH analogue to the semen extender, thus reducing the time needed to carry out the insemination, the risks associated with the use of needles and animal distress. The efficiency of GnRH analogue when administered with the semen extender depends on the degradation of the hormone by aminopeptidases, a group of enzymes present in seminal plasma. In this final degree project, aminopeptidase activity present in seminal plasma of males belonged to the New Zealand White line from five months (beginning of the training of those males used in artificial insemination) to nine months old (adult males with a normal semen production) is determined. For this, semen samples from each male were collected weekly and aminopeptidase activity was measured using three different substrates: alanine, cysteine and leucine-β- naphthylamide. Regarding aminopeptidase activity, it can be distinguished a group of males with a high aminopeptidase activity (around 1000 pmol/mg protein/min) and another group with half of the activity approximately. Correlation between quality sperm parameters and aminopeptidase activity was found, concretely with acrosome status and sperm abnormalities. Significant differences for aminopeptidase activity and male age or kinetic sperm parameters were not found. Regarding the results, it can be concluded that aminopeptidase activity varies among males and is not dependent on male age; this new parameter could be used to choose the best males for the artificial insemination procedure which involves GnRH analogue application with the semen extender.

[ES] En la inseminación artificial del conejo, al ser una especie de ovulación inducida, se requiere un control efectivo de la ovulación, por lo que en el momento de la inseminación hay que inducir la ovulación, lo que habitualmente se hace mediante la aplicación intramuscular de un análogo sintético de la GnRH. El proceso puede simplificarse sustituyendo la aplicación intramuscular de la GnRH mediante su incorporación en el diluyente, lo que reduce el tiempo de aplicación de la dosis seminal a la vez que evita el riesgo asociado al uso de jeringuillas del personal que aplica la dosis y el estrés animal asociado al pinchazo. La eficacia de la hormona en el diluyente depende de varios factores, entre los que destaca la degradación del análogo por parte de las aminopeptidasas, unas enzimas presentes en el plasma seminal. En el presente Proyecto de Fin de Grado se determinó la actividad aminopeptidasa presente en el plasma seminal en machos de origen neozelandés desde los cinco meses de edad (inicio del entrenamiento de los machos utilizados en inseminación artificial) hasta los nueve meses de edad (machos adultos en plena producción de semen). Para ello, se recuperaron muestras de semen semanalmente de los machos y se determinó la actividad aminopeptidasa usando tres sustratos diferentes: alanina, cisteína y leucina-β-naftilamida. En base a los resultados obtenidos, se distingue un grupo de machos con alta actividad aminopeptidasa (alrededor de 1000 pmol/mg protein/min) y otro con una actividad de aproximadamente la mitad. Se observó cierta correlación entre algunos parámetros de la calidad del semen y la actividad aminopeptidasa, concretamente con el estado del acrosoma y anormalidades en el esperma. La edad de los machos no afectó significativamente a la actividad aminopeptidasa. Con los resultados obtenidos se puede concluir que la actividad aminopeptidasa varía en función del macho y es independiente de su edad, pudiéndose utilizar este nuevo parámetro para seleccionar los mejores machos para la técnica de inseminación artificial que utiliza GnRH en el diluyente.