Puesta a punto de métodos de identificación de mutaciones responsables de resistencia a antibióticos de interés en salud pública

Abstract

[EN] The emergence of antibiotic-resistance genes is hindering the effective treatment of patients with nosocomial infections and is becoming a major public health problem. This type of infections acquired in the hospital is especially serious because of patient conditions: a depressed immune system, as a result of the prior pathology for which patient joined the hospital. For this reason, the pursuit of resistances is very important and is carried out in several countries around the world. In this work we search of resistance against beta-lactam antibiotics, one of the types most used in clinic by its broad-spectrum of action. There are different mechanisms by which bacteria increase their resistance; this work focuses on searching degrading enzymes, such as the AmpC, ESBLs and carbapenemases, in P. aeruginosa, E. coli, P. mirabilis, and K. pneumoniae samples. In addition, it has been done the typing of S. aureus and P. aeruginosa samples by sequencing seven genes, according to the technique of MLST, in order to determine the origin of this bacteria and the hospital focus. To perform both of these studies, extracts of pure cultures have been amplified by PCR, purified and sequenced by Sanger. The files obtained were processed using several programs contained in the Staden package to determine the sequences, which were aligned using the program MEGA v5. The whole process allows obtaining a phylogenetic tree of each one of the genes for correct assignment

[ES] La aparición de genes de resistencia frente a antibióticos está dificultando el tratamiento efectivo de los pacientes con infecciones nosocomiales y está convirtiéndose en un problema importante de salud pública. Este tipo de infecciones adquiridas en el hospital son especialmente graves por las condiciones en la que se encuentra el paciente, el cual posee un sistema inmunológico deprimido como consecuencia de la patología previa por la que ingresó en el hospital. Por este motivo, la búsqueda de resistencias es muy importante y se realiza en países de todo el mundo. En nuestro trabajo se realiza la búsqueda de resistencias frente a antibióticos betalactámicos, uno de los tipos más utilizados en clínica por su amplio espectro de acción. Existen diferentes mecanismos por los que las bacterias aumentan su resistencia; este trabajo se centra en la búsqueda de enzimas degradadoras, como son las AmpC, ESBLs y carbapenemasas, en muestras de P. aeruginosa, E. coli, P. mirabilis y K. pneumoniae. Además, se ha realizado el tipado de muestras de S. aureus y P.aeruginosa mediante la secuenciación de siete genes según la técnica de MLST, con el fin de determinar el origen de las bacterias y el posible foco hospitalario. Para realizar ambos estudios se han amplificado por PCR los extractos de cultivo puro, purificado y secuenciado por Sanger. Los archivos obtenidos se procesaron utilizando varios programas contenidos en el pack del Staden para determinar las secuencias, que posteriormente se alinearon mediante el programa MEGA v5. Todo el proceso permite obtener un árbol filogenético de cada uno de los genes que estudiamos para su correcta asignación