Abstract:
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[ES] El objetivo del trabajo es la detección directa de secuencias específicas de ADN genómico sin pasar por la etapa de amplificación. Para ello, se plantean dos hipótesis de trabajo. La primera consiste en inmovilizar ...[+]
[ES] El objetivo del trabajo es la detección directa de secuencias específicas de ADN genómico sin pasar por la etapa de amplificación. Para ello, se plantean dos hipótesis de trabajo. La primera consiste en inmovilizar sondas específicas de diferente tamaño de modo covalente en la superficie polimérica sin alterar las propiedades ópticas de esta, alcanzando densidades de inmovilización elevadas con el fin de aumentar la sensibilidad del ensayo. Como segunda hipótesis se plantea la racionalización y mejora de la fragmentación y el marcaje (biotina, digoxigenina, nanopartículas de oro, etc.) del ADN genómico. La interacción de las dianas marcadas con los receptores anclados en el disco compacto, dará lugar a una señal analítica, dependiente de la concentración de ADN, que será cuantificada por un grabador de DVDs. Los resultados del ensayo propuesto se compararán con los obtenidos mediante amplificación por PCR en términos de sensibilidad, selectividad y versatilidad.
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[EN] The aim of the work was the direct detection of specific sequences of genomic DNA in
hybridization assay without the polymerase chain reaction amplification step. The assays
were performed on polymeric surfaces ...[+]
[EN] The aim of the work was the direct detection of specific sequences of genomic DNA in
hybridization assay without the polymerase chain reaction amplification step. The assays
were performed on polymeric surfaces derived from the audio-video industry. In order to
achieve this challenge, the work was based on the development of a method for the covalent
immobilization of oligonucleotides by means of the chemical surface activation of a compact
disc, keeping at the same time its optical and mechanical properties. In addition, a tyramide
based signal amplification system was implemented in the hybridization assay for the
genomic DNA detection. The principle of the hybridization assay is based on genomic DNA
fragmentation and massive biotinylation. These biotinylated fragments interact with the
specific immobilized probes on the disk, generating an analytical signal which depends on the
biotinylated fragments concentration. This signal is quantified with a DVD player, used as a
detector. The results of the proposed assay are compared with those achieved including the
PCR amplification step in terms of sensitivity, selectivity and versatility.
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