Estudio de la regulación transcripcional del GEN LRRK2 (PARK8)

Abstract

[ES] La enfermedad de Parkinson (EP) es la segunda enfermedad degenerativa más importante, afectando aproximadamente a un 2% de la población mundial. Para esta enferemedad todavía no existe cura. Hasta la fecha, más de 23 locus han sido asociados a la enfermedad, entre los cuales se encuentra LRRK2 (PARK8). Algunas de las mutaciones de LRRK2 son la causa más frecuente de EP, tanto familiar como esporádica. Sin embargo la investigación sobre cómo se regula la transcripción de este gen es prácticamente inexistente. Estudios previos realizados en este laboratorio han dado como resultado la identificación de tres sitios putativos de unión del factor transcripcional NRSF1 (Neuron-Restrictive Silencer Factor 1) en el promotor del gen LRRK2. Este factor limita la expresión en el sistema nervioso reprimiendo la expresión de genes en células no neuronales. El objetivo de este trabajo es identificar cual o cuales de los sitios putativos de unión son funcionales utilizando el plásmido pGL3, que usa la actividad luciferasa como chivato de la expresión. La transfección en la línea celular SH-SY5Y diferenciada a fenotipo neuronal dopaminérgico de la forma silvestre del promotor junto con las formas mutadas para los sitios de unión del factor transcripcional dará una idea de qué sitios son activos, los que posteriormente serán comprobados con ensayos EMSA (Electrophoretic Mobility shift assay) y ChiP (Chromatin Inmuno ¿ Precipitation). También se estudiará el efecto de algunos SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) presentes en los sitios putativos de unión de NRSF1.

[EN] Parkinson’s disease is the second most important neurodegenerative disease, affecting 2% of the worldwide population, although, nowadays, there is still no treatment available to cure it. Until now, 23 loci have been associated with the pathology, among which LRRK2 (PARK8) stands out due to the fact that mutations in this locus are the most common cause of the disease, either inherited or sporadic ones. Nevertheless, at this time, there is little information available about how this gene is transcriptionally regulated. Previous studies in our laboratory (UGM-IBV) have shown the presence of three putative Neuron-Transcription Factor Recognition Elements (NRSE) sites in the promoter of LRRK2. This well-known transcription factor limits the expression of neuronal genes in nonneuronal tissues and cells, repressing the expression in other cell types. The aim of this project is to identify which of the putative NRSE site are functional, cloning the promoter in the pGL3 plasmid which is part of the Dual –Luciferase Reporter System. Using both, differentiated and non-differentiated SH-SY5Y cell line, wild-type and mutated constructions of the LRRK2 promoter region were transfected in order to elucidate which of the NRSE sites are functional.