Efecto de la vitrificación de los embriones sobre su desarrollo fetal y prepuberal

Abstract

[ES] Los embriones preimplantacionales de mamífero son sensibles a las condiciones ambientales en las que se desarrollan, a pesar de ello, son capaces de adaptarse a las alteraciones del ambiente mediante cambios epignéticos. La crioconservación de óvulos y embriones es considerada una herramienta importante no solo en la reproducción humana asistida, sino también para preservar la biodiversidad animal. No obstante la neutralidad de esta técnica ha sido cuestionada durante los últimos años, por lo que se han iniciado estudios acerca de las repercusiones que podría tener a medio y largo plazo sobre los individuos. Por ello el objetivo de este trabajo fue evaluar si la vitrificación de embriones induce alteraciones en el desarrollo prenatal y prepuberal en el conejo, tanto en su crecimiento como a nivel hepático. Así se evaluó el desarrollo prenatal mediante ultrasonografía en individuos procedentes de embriones vitrificados, frescos y controles. Se realizó un seguimiento del crecimiento durante las 9 primeras semanas de vida, tras lo que se sacrificó un grupo de conejos macho y se registró el peso de los órganos de la cavidad torácica y abdominal. Además se estudió la expresión diferencial de genes (APOA4, ELOVL4, LIPC, CLN6, IGF-I, CYP7A1) y metabolitos (ácidos biliares, bilirrubina total, colesterol, albúmina y glucosa) relacionados con el metabolismo lipídico, el metabolismo del colesterol, y sobre crecimiento. Se encontraron diferencias respecto al desarrollo prenatal, el cual comienza tras la implantación, con retraso por parte de los animales procedentes de embriones vitrificados y frescos, pero que es compensado al inicio de la última semana de gestación. Por otro lado, no fueron encontradas diferencias estadísticas ni en la expresión genética ni en los metabolitos relacionados con la función hepática, aunque en algunos de ellos (APOA4, LIPC, CLN6, glucosa y colesterol) será necesaria la ampliación del número de muestras y su reanálisis. Por el contrario sí que se encontraron diferencias significativas respecto a las concentraciones de IGF-I y en los pesos de hígado, glándulas suprarrenales y pulmones, así como en los pesos de los animales al sacrificio. Por tanto se concluye que la vitrificación podría no ser neutral, induciendo cambios en el desarrollo de los individuos, aunque es necesario aumentar el número muestral para determinar la relevancia de estos efectos.

[EN] Preimplantation mammalian embryos are sensitive to environmental conditions where they develop. However, they are able to adapt to changes in the environment through mechanisms which include epigenetic modifications. Oocytes and embryos cryopreservation is considered an important tool not only in assisted human reproduction, but also as a tool in the preservation of animal biodiversity. Nevertheless the neutrality of this technique has been questioned in the last years and as a result, studies have been initiated in order to evaluate the medium and long term effects of this technique on individuals. Then the aim of this study was thus, to evaluate whether early embryos vitrification induces alterations on prenatal and prepubertal development in rabbits, in both growth and hepatic function. Prenatal development was evaluated by ultrasonography of individuals from vitrified embryos, fresh and controls. Growth monitoring was performed during the first 9 weeks of life, after male rabbits were slaughtered, recording the weight of the organs of the chest and abdominal cavity. Furthermore, the differential expression of genes (APOA4, ELOVL4, LIPC, CLN6, IGF-I, CYP7A1) and metabolites (bile acids, total bilirubin, cholesterol, albumin and glucose) related to lipid metabolism, cholesterol metabolism and growth was studied. Differences were found in the prenatal development, which begins after implantation found, with a delay in animals from vitrified and fresh embryos, but this was compensated at the beginning of the last week of gestation. On the other hand no statistical differences were found in either gene expression or metabolites related to liver function, although in some of them (APOA4, LIPC, CLN6, glucose and cholesterol) the sample size needs to be increased and reanalysed. In contrast, significant differences were found in the concentrations of IGF-I and weights of liver, adrenal glands and lungs, as well as the weights of the animals at slaughter. Therefore it concludes that vitrification may not be neutral, inducing changes in the development of individuals, although it is necessary to increase the sample size to determine the relevance of these effects.