Transducción lentiviral dirigida al silenciamiento de Adamts1 en la pared aórtica de ratones: implicaciones patológicas y tropismo viral

Abstract

[ES] Angiotensina II (AngII) es un mediador fundamental en el remodelado vascular y cardíaco, y está implicado en la formación de aneurismas, en hiperplasia de la neoíntima y en hipertrofia cardíaca en modelos animales y en la enfermedad humana. Hemos identificado > de 150 genes dependientes de AngII en células vasculares mediante transcriptómica y encontrado que dos de ellos, Rcan y Adamts1, son importantes reguladores del remodelado de la pared vascular. Recientemente hemos generado ratones deficientes en Adamts1, tanto genéticamente (Adamts1+/-) como mediante su silenciamiento en la pared vascular vía infección con lentivirus expresando siRNAs para Adamts1 (KD-Adamts1). Al igual que hemos observado en ratones Marfan, tanto los ratones Adamts1+/- como los KD presentan dilatación e insuficiencia aórtica (IAo) e hipotensión, lo que sugiere que Adamts1 es un nuevo gen asociado al aneurisma familiar de aorta torácica y disección órtica (FTAAD) de potencial relevancia en la enfermedad humana. Recientemente también hemos determinado que los inhibidores de la Óxido Nítrico Sintasa (NOS) revierten la dilatación aórtica en ratones Adamts1+/- y Marfan. Por ello, proponemos estudiar los mecanismos moleculares y celulares implicados las patologías aórticas en ambos modelos de ratón, y determinar específicamente el papel del NO y rutas de señalización relacionadas en amabas aortopatías. Asimismo proponemos identificar dianas potenciales comunes a ambas patologías, y analizarlas en pacientes con enfermedades aorticas sindrómicas y no-sindrómicas, y mediante abordajes genéticos identificar variantes de Adamts1 y sus sustratos que puedan causar FTAAD. Estos estudios generarán conocimiento sobre las funciones de Adamts1 y de Rcan1 y sus isoformas en condiciones fisiológicas y en enfermedades que cursan con remodelado cardiovascular. Este proyecto tiene un importante potencial traslacional tanto para la identificación de dianas terapéuticas como de marcadores diagnósticos y pronósticos en enfermedades cardiovasculares

[EN] Cardiovascular diseases, which include aneurysms, are the leading cause of death in the world. Although their huge health risk, little is known about the mechanisms involved in aneurysms formation. Thus, there is an urgent need to identify the molecules implicated in pathological vascular remodeling to develop new therapies. ADAMTS1 is an ADAMTS (A Disintegrin And Metalloproteinase with ThromboSpondin motifs type 1) family member that has agrecanase function and it is associated with tissue remodeling, ovulation, wound healing, oncogenesis and angiogenesis. Emerging evidence suggests that Adamts1 has an important role in maintaining the vascular homeostasis. Indeed, partial Adamts1 deficiency induces elastin break, aortic dilation and hypotension. The current mouse model to study the role of Adamts1 in aneurysm formation is base on Adamts1+/- heterozygous mice as the Adamts1-/- homozygous mice are not viable. This project proposes a new experimental mouse model based on the aortic transduction of Lentivirus encoding a siRNA to target specifically Adamts1. Transduction efficiency of the aorta was studied by using different approaches such as qPCR, Western Blot and immunohistochemistry. Aortic levels of transduction were compared through qPCR and immunohistochemistry with the ones saw in liver, heart, spleen, lungs and kidneys. Efficient aortic transduction was associated with an optimal silencing of Adamts1 expression. The decrease observed in the expression was even higher than the deficiency noted in Adamts+/- mice. By using intrajugular delivery of the virus we found that the aorta was the main target when compare to other organs. Therefore, this experimental mouse model is an alternative tool to study the role of Adamts1 during aortic aneurysm formation.