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Producción in vitro de la proteína Klotho para el análisis de muestras humanas de cerebros de Alzheimer

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Producción in vitro de la proteína Klotho para el análisis de muestras humanas de cerebros de Alzheimer

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dc.contributor.advisor Bañuls Polo, Mª José es_ES
dc.contributor.advisor Chillon Rodríguez, Miguel es_ES
dc.contributor.author Blanch García, Rebeca es_ES
dc.date.accessioned 2016-10-17T06:44:46Z
dc.date.available 2016-10-17T06:44:46Z
dc.date.created 2016-09-29
dc.date.issued 2016-10-17 es_ES
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10251/71877
dc.description.abstract [ES] La proteína klotho es una β-glucuronidasa cuya sobrexpresión está relacionada con la prolongación de la vida. A pesar de que su mecanismo de acción todavía no se conoce con exactitud, estudios recientes sugieren que klotho podría evitar el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer (EA) asociado con el envejecimiento, probablemente inhibiendo la señalización insulina/IGF-1, y por lo tanto el daño oxidativo en el cerebro. El objetivo de este estudio es investigar la expresión de la proteína klotho en muestras humanas de cerebros con EA. Para lograrlo, se requiere la producción previa de la proteína klotho in vitro. Con este fin, el gen klotho será clonado en un vector de expresión (pGV). Después, se llevará a cabo la transfección transitoria en la línea celular humana HEK 293 para la producción in vitro de la proteína. El extracto de proteína total será cuantificado. La proteína klotho será analizada por Western Blot y cuantificada por desitometría. Con los datos obtenido se realizará una curva patrón para el posterior análisis y cuantificación relativa de la proteína klotho en las muestras humanas de cerebros. es_ES
dc.description.abstract [EN] Klotho protein is a β-glucuronidase whose overexpression is related to life extension. Despite its mechanism of action is not fully understood, recent studies suggest that klotho might prevent the development of Alzheimer's disease (AD) associated with aging, probably by inhibiting insulin/IGF-1 signaling, hence oxidative injury in the brain. The aim of this study is to investigate the expression of klotho protein in human samples of AD. To achieve this, in vitro production of human recombinant klotho is previously required. For this purpose, klotho gene will be cloned in an expression vector (pGV). After that, transient transfection in the human cell line HEK 293 will be performed for in vitro klotho production. The total protein extract will be then quantified. Klotho protein will be analysed by Western Blot and quantified by densitometry. With these data, a calibration curve will be obtained for subsequent analysis and relative quantification of human brain samples. es_ES
dc.description.abstract [CAT] La proteïna Klotho és un factor neuroprotector rel·lacionat amb l’envelliment i la malaltia d’Alzheimer (AD, de l’anglés Alzheimer’s disease). La variant secretada de la proteïna (s-KL), la més expressada en humans, sembla tindre un paper important en el manteniment de les funcions cognitives. És per això que l’estudi de la variant s-KL en humans és de gran rellevància per poder entendre la seua implicació en l’AD i l’envelliment. En aquest treball, el cDNA de la proteïna s-KL humana va ser clonat en un vector d’expressió eucariota. Després, la proteïna s-KL fou produïda per transfecció transitòria en la línia cel·lular humana HEK-293, i els seus extractes proteics foren quantificats i analitzats per Western Blot. La immunodetecció de s-KL es va realitzar mitjançant un anticòs específic (K-18.2) mai abans utilitzat, i per al qual es va desenvolupar un nou protocol. Aquest assaig va permetre avaluar la producció de s-KL per les cèl·lules transfectades i la especificitat del nou anticòs K-18.2. Finalment, es va portar a terme una validació complementaria de l’anticòs K-18.2 utilitzant extractes proteics de cervells humans, obtinguts de pacients sans i malalts d’AD. es_ES
dc.format.extent 47 es_ES
dc.language Español es_ES
dc.publisher Universitat Politècnica de València es_ES
dc.rights Reserva de todos los derechos es_ES
dc.subject Klotho es_ES
dc.subject Alzheimer’s disease es_ES
dc.subject Cloning es_ES
dc.subject Transfection es_ES
dc.subject Human es_ES
dc.subject Brain es_ES
dc.subject Enfermedad de Alzheimer es_ES
dc.subject Clonaje es_ES
dc.subject Transfección es_ES
dc.subject Western blot es_ES
dc.subject Humano es_ES
dc.subject Cerebro es_ES
dc.subject Malaltia d’Alzheimer es_ES
dc.subject Clonatge es_ES
dc.subject Transfecció es_ES
dc.subject Humà es_ES
dc.subject Cervell es_ES
dc.subject.classification QUIMICA ANALITICA es_ES
dc.subject.other Grado en Biotecnología-Grau en Biotecnologia es_ES
dc.title Producción in vitro de la proteína Klotho para el análisis de muestras humanas de cerebros de Alzheimer es_ES
dc.type Proyecto/Trabajo fin de carrera/grado es_ES
dc.rights.accessRights Abierto es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Departamento de Química - Departament de Química es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural - Escola Tècnica Superior d'Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural es_ES
dc.description.bibliographicCitation Blanch García, R. (2016). Producción in vitro de la proteína Klotho para el análisis de muestras humanas de cerebros de Alzheimer. http://hdl.handle.net/10251/71877. es_ES
dc.description.accrualMethod TFGM es_ES
dc.relation.pasarela TFGM\48563 es_ES


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