EMBRYOLOGICAL AND MICROMANIPULATION TECHNIQUES IN ZEBRAFISH (Danio rerio) AND PACIFIC OYSTER (Crassostrea gigas)

Abstract

En este trabajo de tesis, se presentan diversos estudios experimentales, desarrollados prin cipalmente en pez cebra pero también en ostra del Pacífico, que persiguen la puesta a punto de técnicas relevantes para la utilización de estas dos especies en el campo de la biomedicina, la toxicogenómica y la acuicultura como modelo experimental. En pez cebra, se han puesto a punto y testado: Técnicas de vitrificación de tejido de aleta caudal, de blastómeras (en microvolúmenes) y de tejido gonadal. Técnica de quimerismo de la línea germinal en estadio MBT, con una penalización previa por radiación ultravioleta de los embriones receptores. Técnica de quimerismo larvario (larvas de 48-72 h) utilizando como donantes células testiculares obtenidas de individuos adultos y previamente criopreservadas. Técnica de transplante nuclear utilizando como donantes núcleos de células somáticas adultas y larvarias. Técnica de electroactivación en medio iónico de oocitos de pez cebra.

In ostra del Pacífico, se han puesto a punto y testado: Evaluación de los cambios estacionales en la calidad oocitaria y espermática en ostra del Pacífico. Técnica de electrofusión cigótica de cigotos obtenidos por fecundación in vitro en ostra del Pacífico. Técnicas de vitrificación de tejido de aleta caudal, de blastómeras (en microvolúmenes) y de tejido gonadal. En relación con este grupo de técnicas, señalar el diferente nivel de dificultad de cada una de ellas e incluso de los resultados alcanzados. Así, la vitrificación de tejido de la aleta caudal no ha supuesto problema adicional respecto a la aplicación de dicha técnica en los últimos años a tejidos epiteliales de cinco especies de mamíferos, lo que da idea de la versatilidad en el uso de dicha técnica de vitrificación básica. Por contra, la criopreservación de blastómeras ha supuesto un verdadero reto, ya que los patrones de permeabilidad celular en esta especie acuática es muy diferente a la característica en mamíferos.