Identificación y caracterización de mutantes de tomate con alteraciones en el desarrollo vegetativo

Abstract

[ES] Estudiar la función de los genes que participan en procesos clave del desarrollo vegetal y su interacción con el medio aporta información muy importante, tanto básica como aplicada. Una aproximación para ello es la generación de mutantes para estos caracteres y su posterior caracterización. Si para ello se utiliza T-DNA como agente mutágeno, además de producir un mutante, el gen afectado queda etiquetado por el inserto de secuencia conocida, por lo que su clonación es más sencilla y rápida. En este trabajo se han analizado un total de 40 líneas T-DNA de Solanum lycopersicum variedad Money Maker, transformadas con una trampa de intensificadores. Para ello se han empleado tanto técnicas de cultivo in vitro como técnicas de cultivo convencional en el invernadero. El objetivo final era detectar nuevos mutantes con alteraciones en el desarrollo vegetativo. Aplicando este abordaje se han detectado tres nuevos mutantes. Uno de ellos con el desarrollo radicular afectado y los otros dos con un fenotipo compacto en la parte aérea. En todos ellos se ha realizado la caracterización fenotípica in vitro e in vivo y la caracterización genética. Se ha determinado el tipo de mutación, el número de insertos integrados y, combinando ambos análisis, la presencia de cosegregación entre algún inserto T-DNA con el fenotipo mutante. A partir de esta información se podrá iniciar las tareas para poder identificar el gen responsable de cada mutación.

[EN] Studying the function of genes that play a key role in vegetative development and its interaction with the environment provides important basic as well as applied information. A good approach for this purpose is the generation of mutants and its subsequent characterization. If T-DNA is used as a mutagenic agent, besides generating a mutant, the affected gene remains tagged by the insert which sequence is known, which makes the cloning process simpler and faster. In this work, a total of 40 T-DNA lines of Solanum lycopersicum variety Money Maker transformed with an enhancer trap have been studied. For this purpose, plant tissue culture and greenhouse techniques have been used. The main aim of this project was to find mutants affected in the vegetative development. Applying this procedure three new mutants have been identified. One affected in the root development, and two showing an aerial compact phenotype. For all of them, in vitro and in vivo phenotypic characterization as well as genetic characterization was carried out. The type of mutation and the number of inserts has been determined for each line. And by combining this two analysis, the determination of cosegregation between a T-DNA insert with the mutant phenotype has also been studied. This information constitutes the foundation for further investigation on the gene involved in each mutation.