Estudio de inmunoensayos para la determinación de residuos del insecticida spirotetramat en alimentos

Abstract

[ES] Hoy en día los plaguicidas están muy presentes en los alimentos, ya que se utilizan para proteger a las plantas y animales de cualquier tipo de plaga y su presencia constituye una fuente de contaminación para los seres humanos, por lo que se establecen límites máximos de residuos de estos plaguicidas para cada alimento. El objetivo de este trabajo es el estudio de la influencia de distintos factores fisicoquímicos sobre una serie de inmunoensayos desarrollados para la determinación de los residuos del insecticida spirotetramat en alimentos. Debido a que este insecticida se hidroliza a spirotetramat-enol tras la absorción por la planta, y que se ha establecido un único límite máximo de residuos con la suma de ambos residuos, en este trabajo se estudiará tanto spirotetramat como su metabolito. En concreto se ha evaluado la influencia del pH, la fuerza iónica, el disolvente etanol, y dos matrices alimentarias (vino blanco y vino tinto) sobre los principales parámetros analíticos de cinco inmunoensayos distintos, utilizando anticuerpos monoclonales y policlonales. Los resultados obtenidos demuestran que los anticuerpos monoclonales funcionan mejor en las condiciones de ensayo que los policlonales, y se observó que el formato indirecto fue el más estable de todos, manteniendo la señal máxima (Amax) y sensibilidad del ensayo (IC50) alrededor del valor de referencia en la mayoría de los estudios. De manera general se observó que el pH no influye significativamente en la detección de los analitos. En cuanto al estudio de fuerza iónica, se observa un aumento de Amax y de la IC50 a fuerzas iónicas altas para el formato directo y el directo de captura, y una bajada de ambas al disminuir la fuerza iónica. En los formatos indirectos ocurre el efecto contrario. El estudio del disolvente etanol muestra que concentraciones altas producen una bajada de señal, siendo esta pérdida más destacable para el formato directo y captura, y por el contrario la IC50 aumenta considerablemente cuanto más etanol hay en el ensayo. Tras el estudio del efecto matriz, se observa que el vino blanco no influye demasiado en la señal, mientras que el vino tinto afecta en gran medida, disminuyendo la Amax cuanta más matriz hay en el ensayo. En cambio, la IC50 en este estudio se mantiene bastante estable en todos los formatos. Los tres inmunoensayos con anticuerpos monoclonales son buenos candidatos para su aplicación al análisis de residuos de spirotetramat en alimentos, particularmente el ensayo con anticuerpo de captura y el indirecto.

[EN] Nowadays, pesticides are really present in food, as they are used to protect plants and animals from any type of pest. Their presence constitutes a source of contamination for human beings, so that maximum residue limits of these pesticides on food are established. The aim of this project is to study the influence of different physicochemical factors on a series of immunoassays carried out in order to determine the residues of the spirotetramat insecticide in food. Due to the fact that this insecticide is hydrolyzed to spirotetramat-enol after the plant¿s absorption, and that a single maximum residue limit has been established with the sum of both residues, both spirotetramat and its metabolite will be studied in this investigation. Specifically, the influence of pH, ionic strength, ethanol solvent, and two food matrices (white wine and red wine) on the main analytical parameters of five different immunoassays will be considered, using monoclonal and polyclonal antibodies. The results show that, under the parameters of this study, monoclonal antibodies work better under test conditions than polyclonal antibodies. It has also been observed that the indirect format was the most stable of all, maintaining the maximum signal (Amax) and sensitivity of the assay (IC50) around the reference value in most studies. In general, it was observed that pH does not significantly influence the detection of analytes. As for the ionic strength study, an increase of Amax and IC50 up to high ionic forces is observed for the direct and direct capture format; and a decrease of both when the ionic strength decreases. In indirect formats occurs the opposite effect. The study of the ethanol solvent shows that high concentrations of it reduce its signal. This loss of signal is more remarkable for the direct format and capture. On the contrary, the IC50 increases considerably as more ethanol is in the assay. After studying the matrix effect, it is observed that white wine does not influence the signal that much, whereas red wine affects it to a great extent, decreasing the Amax as more matrix there is in the assay. In contrast, in this study, the IC50 remains quite stable in all formats. The three monoclonal antibody immunoassays are good candidates for their application to the analysis of spirotetramat residues in food, particularly the capture antibody assay and the indirect antibody assay.