Análisis en biopsia líquida del estado mutacional de los genes RAS en cáncer colorrectal metastásico. Implicaciones terapéuticas

Abstract

[ES] El análisis de mutaciones en los genes RAS (KRAS y NRAS) es determinante a la hora de seleccionar el tratamiento en pacientes con cáncer colorrectal metastásico, pues se sabe que mutaciones en dichos genes confieren resistencia a la terapia con anticuerpos monoclonales antiEGFR. Los cambios en el estado mutacional de dichos genes se pueden monitorizar mediante el análisis del ADN tumoral circulante (ADNtc), pero para ello se requieren tecnologías con una elevada sensibilidad y especificidad. El objetivo principal del presente trabajo es analizar el estado mutacional de los genes KRAS y NRAS en pacientes de cáncer colorrectal metastásico mediante tecnologías basadas en PCR digital en biopsia líquida; así como determinar el estatus mutacional durante la evolución tumoral. El estudio se realizó con 25 pacientes con CCRm; realizando el análisis del estado mutacional de los genes KRAS y NRAS en plasma mediante el sistema de PCR digital en emulsión BEAMing (Beads, Emulsion, Amplification, Magnetics) en el momento basal antes de iniciar tratamiento y analizando el grado de concordancia con los resultados de biopsia tisular. Posteriormente, se determinó la presencia de mutaciones en RAS mediante muestras de sangre seriadas durante los diferentes tratamientos de los pacientes. Se detectaron mutaciones en el 40% de los casos en la determinación basal, con una concordancia general de 92% entre el análisis en tejido y plasma (índice Kappa=0,833, p-value<0,0001). Durante la monitorización de la evolución tumoral se advierten cambios en la concentración de ADN libre circulante (ADNlc), en el estado mutacional de RAS y en la fracción mutante. Trece pacientes progresaron al tratamiento en primera línea, lo que puede ser explicado por el aumento en los niveles de ADNlc y la detección de mutaciones en los genes RAS. Asimismo, mutaciones en estos genes se asocian con una menor supervivencia global (p-value=0,015). En conclusión, el análisis del ADNtc mediante biopsia líquida constituye una excelente aproximación para la detección de mutaciones en los genes RAS en el momento del diagnóstico y durante la monitorización de la evolución tumoral en pacientes con CCRm, permitiendo seleccionar el tratamiento que mejor se ajusta a cada paciente en cada momento.

[EN] Mutation analysis in RAS genes (KRAS and NRAS) is decisive to select the correct treatment for a metastatic colorectal cancer patient, as they are known to confer resistance to anti-EGFR monoclonal antibody therapy. Monitoring of RAS mutational status is possible by circulating tumor DNA (ctDNA) analysis, but ultrasensitive and high specificity methodologies are required. Therefore, the aim of this study is to analyze KRAS and NRAS mutational status of metastatic colorectal patients by digital PCR technologies at basal moment and tumor evolution monitoring. The study was carried out in 25 metastatic colorectal patients. RAS mutations were analyzed by BEAMing system (Beads, Emulsion, Amplification, Magnetics) to study concordances between tissue and liquid biopsy at basal moment. Later, RAS mutations detection was performed in blood samples from patients undergoing several treatment lines. RAS mutations were detected in 40% of the cases at the basal moment. The overall percentage agreement between tissue-based and plasma-based RAS mutation testing was 92% (Kappa=0.833, p-value<0.0001). Changes in cell-free DNA (cfDNA) levels, RAS mutational status and mutant fraction were found by tumor evolution monitoring. Thirteen patients progressed on first line treatment, which can be explained by the increase of cfDNA levels and RAS mutations detection. Moreover, the presence of RAS mutations was correlated with poor overall survival (pvalue=0.015). In conclusion, ctDNA analysis by liquid biopsy represent an excellent approach to detect RAS mutations at basal moment and tumor evolution of metastatic colorectal patients in order to select the best treatment for each patient.