Establecimiento de una metodología alternativa a la experimentación animal para la evaluación del potencial de sensibilización cutánea de los antineoplásicos Imatinib y Erlotinib

Abstract

[ES] Según la United Nation Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN GHS), se entiende que un compuesto químico es un sensibilizante cutáneo si es capaz de desencadenar una reacción alérgica cutánea al entrar en contacto con la piel. Se ha observado que no sólo cosméticos o medicamentos de aplicación tópica producen este tipo de reacciones, sino que algunos fármacos de distribución sistémica también pueden llegar a producirlas. Dichas reacciones suelen caracterizarse por una serie de reacciones en cadena (AOP, Adverse Outcome Pathway), siendo la primera de ellas la unión covalente de un hapteno a una proteína transportadora de la piel dando como resultado un complejo que puede llegar a activar a los keratinocitos, y éstos a su vez a las células dendríticas, o bien, activarlas directamente; desencadenándose en cualquier caso una respuesta inmune al producirse la activación de los linfocitos T en los nódulos linfáticos. Normalmente la evaluación del potencial sensibilizante de cualquier compuesto era evaluado por procedimientos in vivo. Recientemente, con perspectivas de reducir al máximo la experimentación animal y, aprovechando esta serie de acontecimientos propios de las reacciones sensibilizantes cutáneas, se propone un procedimiento con el cual predecir el potencial sensibilizante de antineoplásicos, en este caso Erlotinib e Imatinib, empleando técnicas in vitro e in chemico ya aprobadas previamente para su uso en cosméticos por la OECD (Organisation for Economic Co-operation and Development). Para ello se analizarán ambos antineoplásicos. En primer lugar, mediante la técnica de DPRA (Direct Peptide Reactivity Assay), se pretende medir la capacidad de los compuestos a testar de formar el complejo activante hapteno-proteína. Empleando un Test de ARE-Nrf2 Luciferasa, por cultivo in vitro de la línea celular KeratinoSensTM, comprobar la activación de kertinocitos. Y, por último, por citometría de flujo, mediante h-CLAT (human- Cell Line Activation Test), cuantificar la variación de la presencia de ciertos marcadores de membrana (CD86 y CD54) característicos de la activación de las células dendríticas.

[EN] According to the United Nation Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN GHS), a chemical compound is understood as a skin sensitizer if it is capable to lead an allergic response following skin contact. It has been observed that not only cosmetics or medications with topical application could produce this kind of reactions, also other drugs with systemic distribution can do it too. These reactions usually are characterized by following an Adverse Outcome Pathway (AOP), being the first event of it the covalent union between the hapten and the skin transporter protein resulting on a complex formation that can activate the keratinocytes and those activate the dendritic cells, or just activate the last ones directly; in either case, the immune response will develop once the activation of T cells occur in the limph nodes. Normally the evaluation of the sensitizing potential of any compound was evaluated by in vivo procedures. Recently, with the prospect of minimizing animal experimentation and, taking advantage of this series of events typical of skin sensitizing reactions, a procedure is proposed to predict the sensitizing potential of antineoplastic agents, in this case Erlotinib and Imatinib, employing in vitro and in chemico technics previously approved for their use with cosmetics by the OECD (Organisation for Economic Co-operation and Development). Both antineoplasics will be analyse. Firstly using the DPRA technic (Direct Peptide Reactivity Assay), the ability of the compounds to be tested to form the hapten-protein activating complex pretends to be measured. With the aim to verify the keratinocytes activation an ARE-Nrf2 Luciferase test will be done through an in vitro culture of KeratinoSensTM cell line. And ultimately, by flow cytometry, employing an h-CLAT (human- Cell Line Activation Test), quantify the variation in the presence of certain membrane markers (CD86 and CD54) characteristic of dendritic cell activation.