Desarrollo de microarrays de altas prestaciones basados en atrapamiento con un hidrogel. Aplicación a inmunoensayo y ensayos genéticos

Abstract

[ES] La detección temprana de enfermedades muchas veces se basa en la medición de una o varias proteínas y/o en el análisis genético. El formato microarray es un buen candidato para aplicarlo a los dispositivos de detección porque posee una gran capacidad de trabajo y poco consumo de reactivos y muestra. En este formato la inmovilización del receptor es crucial en las prestaciones del ensayo final. Tradicionalmente, la inmovilización covalente ha sido la mejor considerada, por su robustez y fiabilidad, aunque existen alternativas interesantes, como el uso de hidrogeles que atrapan en su interior a los bioreceptores. En este trabajo se fabricará un nuevo microarray, basado en un hidrogel generado por entrecruzamiento -inducido por luz- de un derivado de la fosforilcolina. Como soporte sólido se ha escogido el disco Blu-Ray, porque el grupo de investigación dispone de una tecnología propia que usa discos compactos como plataforma de ensayo y lectores comerciales como detector.

[EN] The development of new DNA detection systems more sensitive and selective is an interesting area in the biomedical yield. In this sense, simple, fast, versatile, small size, automatable and economic devices are looked for. This is why microarray technology is so relevant. Although this technology has been growing in recent years, it still has several disadvantages, many of them related with to the immobilization of probes, which often affect the reproducibility and the sensitivity of the assays. In this paper, the use of a phosphoryilcholine (MPC) hydrogel, which is formed in a few minutes on the surface of highly hydrophobic supports, such as Blu-ray (BD) disks, while incorporating the probes by UV light activated reactions, is proposed. Its use increases the density of immobilized probe and reduces the anchor time. Generated microarrays have shown a higher sensitivity compared to the traditional microarrays besides having a better ability to discriminate Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs). Furthermore, the MPC units contained in the microarray of hydrogel, allows its use to detect C-reactive protein (CRP) simply and with high sensitivity, due to the ability of specific recognition of the MPC to this protein.