Caracterización de la interacción entre Stbd1 y Laforina. Determinación de su posible papel para el desarrollo de la enfermedad de Lafora

Abstract

[ES] La línea fundamental de trabajo de este laboratorio consiste en la caracterización molecular de rutas fisiológicas alteradas en la enfermedad de Lafora, así como posibles tratamientos de la enfermedad. La enfermedad de Lafora (LD. OMIM 254780) es una enfermedad neurodegenerativa autosómica recesiva que conlleva epilepsia mioclónica progresiva y presenta un desenlace fatal. Las mutaciones que causan la enfermedad de Lafora han sido identificadas en dos genes EPM2A, que codifica para una fosfatasa dual, la laforina, y EMP2B (NHLRC1) que codifica la proteína denominada malina, una E3 ubiquitin ligasa. El objetivo principal del trabajo de Mª Victoria García Castiglioni consistirá en determinar el posible papel de STBD1 (Starch-Binding Domain-containing protein 1) en la modulación de la localización de Laforina en distintas condiciones, dado que se ha visto que la laforina interacciona con STBD1 con localización en retículo endoplásmico. y, por otra parte, en condiciones de ausencia de glucosa la laforina presenta localización nuclear.

Este estudio se va a realizar mediante diferentes aproximaciones: 1. Sobreexpresión de STBD1 en líneas de neuroblastoma para determinar si esto conlleva un cambio en la localización subcelular de Laforina en condiciones de ayuno de glucosa. 2. Silenciamiento de STBD1 en células neuronales

La estudiante aprenderá técnicas de biología molecular, cultivos celulares y microscopia a lo largo de sus prácticas.

[EN] The Lafora disease (LD, OMIM: 254780) is a progressive myoclonic epilepsy, which is characterized by a neuronal degeneration, accumulation of insoluble and poorly branched glycogen inclusion bodies (named Lafora bodies) and an imbalance in the protein homeostasis (proteostasis). STBD1 (Starch binding domain-containing protein 1) is involved in glycogen metabolism, probably in its degradation. This protein contains a carbohydrate binding domain which might have a function anchoring glycogen to membranes. Under stress conditions, such as glucose deprivation, STBD1 interacts with laforin, one of the proteins whose mutation causes the Lafora disease. In these conditions, it has also been shown that the cellular localisation of laforin changes from the citoplasm to the nucleus, in that regard it could be possible that STBD1 might act as an anchor for laforin in the cytoplasm when the stress is absent. It is also known that laforin and an E3 ubicuitin ligase, malin, the other protein whose mutation causes Lafora disease, form a functional complex. The complex promotes the ubicuitination of, amongst others, proteins involved in the glycogen metabolism, which undergo autophagy-mediated degradation. STBD1 could be a substrate of ubiquitination of the malin-laforin complex. In our work, we have demonstrated that STBD1 is a substrate of ubiquitination of this complex, and the topology of polyubiquitination is formed through lysine-63 residues of the ubicuitin molecules, which indicates that STBD1 would be degraded by autophagy modulated at least in part by the malinlaforin complex.