Interacción entre giberelinas y auxinas en tomate Micro Tom

Abstract

[ES] Existen diferentes hipótesis sobre cómo las hormonas vegetales influyen entre sí. En el presente trabajo se hace un estudio sobre cómo la presencia de giberelinas puede influir en la síntesis y acción de las auxina en líneas de tomate Micro-Tom. Para ello se han utilizado distintas líneas en las cuales la síntesis de giberelinas ha sido modificada, bien sobreexpresando la enzima 20-oxidasa en la línea 20ox provocando una presencia mayor de giberelinas, silenciando los genes que codifican el represor DELLA en la línea Pro, lo cual hará que la respuesta a giberelinas este activada constitutivamente, o silenciando los genes que codifican la enzima 2-oxidasa, encargada de la desactivación de las giberelinas activas en las líneas L1. Utilizando estas, vamos a cuantificar mediante HPLC-MS/MS la cantidad de auxinas en distintas alturas del tallo para poder ver cómo las giberelinas han influido en su producción. Por otro lado, se utilizaron estas líneas para hacer un estudio de germinación, viendo que las líneas que mejor germinaron fueron las que mayor cantidad de giberelinas presentaban. También se cuantificarán los niveles de giberelinas para ver si los cambios génicos en estas líneas han sido efectivos. Para poder comprender y ver mejor cómo actúan las auxinas ,se han hecho tinciones GUS en tallos modificados genéticamente mediante la construcción DR5-GUS y así poder marcar las zonas donde esté presente esta hormona en el tallo. Tras la cuantificación y las tinciones GUS se pudo ver cómo las auxinas se acumulan en el ápice del tallo principalmente. Además, las líneas que sobreexpresaban giberelinas tenían mayor cantidad de auxinas, por lo que es lógico suponer que estas tienen un papel importante en su biosíntesis.

[EN] There are different theories about how the vegetable hormones interact between each other. This work tries to make a study about how the presence of gibberellins can affect the auxin synthesis in tomato Micro-Tom. For doing that, several tomato lines have been used in which the gibberellins synthesis has been modified. In one of this lines, the 20ox, the genes that encode the enzyme 20-oxidase have been overexpressed, so there will be more Gibberellins. In other line, named Pro, the genes that codified the repressor DELLA have been silenced. The last line that modified the gibberellins level is L1 and is characterized by the silencing of the genes that encode the enzyme 2-oxidase that deactivates the gibberellins active forms. Using this lines the auxins amount will be quantified by HPLC- MS/MS in different sections of the stem to see how gibberellins can affect in the auxin synthesis. This lines were also used in a germination study to see how gibberellins affect this process, seeing that the lines which have more amount of this hormone had a better germination. The gibberellin level of these lines was also quantified to see if the genetic changes have been completed. To see and understand better how auxins work and where they are located in the stem GUS stains were made in genetically modified tomato lines that had the DR5-GUS construction that allows to locate this hormone. After the quantification and GUS stain we could see that the auxins are accumulated in the stem apex. Finally, the lines that had more gibberellins showed a bigger amount of auxins, what make us suppose that the gibberellins have an important role in the synthesis of these hormones.