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Resumen:
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[EN] Since
the
development
of
techniques
for
in
vitro
embryo
production
there
is
an
important
demand
of
methods
to
assess
the
quality
of
the
generated
embryos.
One
of
the
main
criteria
to
a ...[+]
[EN] Since
the
development
of
techniques
for
in
vitro
embryo
production
there
is
an
important
demand
of
methods
to
assess
the
quality
of
the
generated
embryos.
One
of
the
main
criteria
to
assess
the
quality
of
produced
blastocysts
is
the
ratio
between
the
number
of
inner
cell
mass
(ICM)
and
trophectoderm
(TE).
Nanog
and
Cdx2
proteins
are
founded
in
the
ICM
cells
and
TE
cells
respectively
in
mouse
embryos.
The
aim
of
this
work
was
tune
up,
in
our
laboratory,
the
immunodetection
analysis
of
Nanog
protein
in
goat
and
sheep
embryos
produced
by
in
vitro
fertilization
(IVF)
and
parthenogenesis.
We
have
produced
640
ovine
embryos
by
IVF
and
1083
by
parthenogenetic
activation
(PA).
In
caprine
we
produced
205
embryos
by
IVF
and
66
by
PA.
All
produced
embryos
are
grouped
in
three
different
groups:
2
to
8
cells
embryos,
morulae,
and
blastocysts.
We
used
the
routine
techniques
of
laboratory
to
carry
out
IVF
and
PA.
For
the
Nanog
protein
analysis
we
used
286
embryos
and
different
protocols
were
performed
to
optimize
the
suitable
one
for
sheep
and
goats.
By
using
the
original
immunodetection
protocol
(mouse),
it
was
observed
that
Nanog
protein
needed
an
optimization
by
changing
the
primary
antibody
from
the
original
(polyclonal
rabbit
anti-‐Nanog)
to
the
human
one
(rabbit
anti-‐Human
Nanog).
We
found
expression
of
Nanog
protein
in
each
cell
in:
2-‐8
cells
embryos,
morulae
and
blastocysts.
It
was
contrary
to
our
expectations
considering
that
the
mouse
Nanog
protein
is
localized,
in
blastocysts,
only
in
the
ICM
cells
and
it
is
not
found
in
the
previous
embryonic
stages.
Our
produced
blastocysts
shows
Nanog
signal
in
66’7%
and
89’6%
en
sheep,
and
83’6%
and
60’5%
in
goat
of
total
cells,
which
indicates
that
this
signal
was
also
localized
in
the
TE
cells
and
not
only
on
the
ICM,
as
it
was
expected.
The
Cdx2
was
located
in
68’97%
of
cells
in
the
blastocyst
stage,
indicating
that
the
labeling
was
correct
only
in
the
TE.
In
conclusion,
our
data
do
not
show
significant
differences
between
sheep
and
goat
embryos
produced
by
IVF
and
PA.
[-]
[ES] Desde
que
se
desarrollaron
las
técnicas
de
producción
de
embriones
in
vitro
existe
una
demanda
de
métodos
que
permiten
evaluar
la
calidad
de
los
embriones
generados.
Uno
de
los
criterios ...[+]
[ES] Desde
que
se
desarrollaron
las
técnicas
de
producción
de
embriones
in
vitro
existe
una
demanda
de
métodos
que
permiten
evaluar
la
calidad
de
los
embriones
generados.
Uno
de
los
criterios
de
la
calidad
de
los
blastocistos
producidos
es
la
relación
entre
el
número
de
células
del
Masa
Celular
Interna
(MCI)
y
del
Trofoectodermo
(TE).
La
proteína
Nanog
y
la
Cdx2,
son
proteínas
que
se
encuentras
en
la
MCI
y
TE,
respectivamente
en
embriones
de
ratón.
El
objetivo
de
este
trabajo
fue
poner
a
punto
en
nuestro
laboratorio
en
embriones
caprinos
y
ovinos
producidos
por
fecundación
in
vitro
(FIV)
y
partenogénesis,
el
análisis
de
inmunodetección
de
la
proteína
Nanog.
Producimos
640
embriones
ovinos
mediante
FIV
y
1083
embriones
por
activación
partenogenética
(AP).
En
caprino
producimos
205
embriones
por
FIV
y
66
por
AP.
Los
embriones
producidos
son
agrupados
en
tres
grupos:
embriones
de
2
a
8
células,
mórulas
y
blastocistos.
Las
técnicas
utilizadas
para
la
FIV
y
AP
son
las
rutinarias
del
laboratorio.
Para
el
análisis
de
la
proteína
Nanog
utilizamos
286
embriones
con
diferentes
protocolos
hasta
optimizar
el
adecuado
para
ovino
y
caprino.
Utilizando
el
protocolo
de
inmunodetección
original
(de
ratón),
se
observó
que
la
proteína
Nanog
necesitó
una
optimización
para
los
embriones
de
oveja
y
cabra,
cambiando
el
anticuerpo
primario
original
rabbit
polyclonal
anti-‐Nanog
por
rabbit
anti-‐Human
Nanog.
Encontramos
expresión
de
la
proteína
Nanog
en
cada
célula
de
embriones
de
2-‐8
células,
mórulas
y
blastocistos,
contrariamente
a
lo
esperado
ya
que
la
proteína
Nanog
de
ratón
solo
se
localiza
en
las
células
MCI
y
no
en
los
anteriores
estadios
embrionarios.
En
nuestros
blastocistos
producidos
se
observa
que
el
número
de
células
con
señal
Nanog
es
del
66’7%
y
89’6%
en
ovino,
y
83’6%
y
60’5%
en
caprino
del
total
de
células,
lo
que
indica
que
esta
señal
estuvo
localizada
también
en
las
células
del
TE
y
no
solo
en
las
del
MCI,
como
era
lo
esperado.
El
Cdx2
se
localizó
en
el
68’97%
de
las
células
del
blastocisto,
indicando
que
era
correcto
su
marcaje
solo
en
las
TE.
En
conclusión
nuestros
datos
no
muestras
diferencias
significativas
entre
los
embriones
de
ovino
y
caprino
producidos
mediante
FIV
y
AP
[-]
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