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Modelos de toxicidad por péptidos RAN con polialaninas y poliserinas en Caenorhabditis elegans

RiuNet: Institutional repository of the Polithecnic University of Valencia

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Modelos de toxicidad por péptidos RAN con polialaninas y poliserinas en Caenorhabditis elegans

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dc.contributor.advisor Vázquez Manrique, Rafael es_ES
dc.contributor.advisor Gómez Escribano, Ana Pilar es_ES
dc.contributor.advisor García Gimeno, María Adelaida es_ES
dc.contributor.author Leiva Yuste, Diego es_ES
dc.date.accessioned 2017-10-16T08:31:48Z
dc.date.available 2017-10-16T08:31:48Z
dc.date.created 2017-09-22
dc.date.issued 2017-10-16 es_ES
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10251/89164
dc.description.abstract [ES] La enfermedad de Huntington (EH) es una patología neurodegenerativa de herencia autosómica dominante y de baja prevalencia. Se encuentra dentro de los desórdenes causados por expansiones de tripletes CAG. En el exón 1 del gen de la huntingtina (htt) se encuentra una secuencia repetitiva de tripletes CAG, que cuando es anormalmente larga (36 o más repeticiones), produce una proteína, llamada huntingtina (Htt) con una ganancia tóxica de función. La Htt mutante (mHtt) tiene tendencia a plegarse mal, y tiende a agregarse, produciendo al final cuerpos de inclusión en la célula. Además de la mHtt, el gen htt produce otros productos tóxicos. Por ejemplo, el ARN que porta estas repeticiones CAG es tóxico por sí mismo. Además, se sabe que se producen péptidos raros que a partir de una traducción no convencional independiente de ATG, lo cual se ha denominado RAN translation (del inglés Repeat-associated non-ATG translation (RAN translation)). Al producirse de forma independiente de ATG, la traducción de este ARNm ocurre en las 3 pautas de lectura. Nuestro objetivo es generar un modelo de gusanos C. elegans que exprese alguna de estos péptidos raros, para comprobar si existe toxicidad, y poder investigar el mecanismo de esta y quizás, en el futuro encontrar sustancias que la eliminen. Para ello, primero, se construyeron varios vectores de expresión para modelizar la toxicidad debida a los péptidos de poliserinas y polialaninas. Las construcciones de ADN se obtuvieron por diferentes técnicas de biología molecular y empleando recombinación homóloga, mediante el sistema de clonación Gateway. Finalmente, se consiguió generar una construcción que codificaba 158 polialaninas. Con esta construcción, se generaron animales transgénicos mediante microinyección, que expresaban este péptido con las repeticiones de polialaninas en todo el sistema nervioso. Se verificó la expresión del transgén a nivel de mensajero (qPCR) y se intentó hacerlo a nivel de proteína (Western Blot). Por último, se confirmó mediante un ensayo de comportamiento del gusano que la expresión de la construcción con las polialaninas es toxica para el nematodo C. elegans. es_ES
dc.description.abstract [EN] Huntington's disease (HD) is a neurodegenerative pathology with autosomal dominant inheritance and low prevalence. It is included within the disorders caused by CAG triplet expansions. In exon 1 of the huntingtin (htt) gene is a repetitive sequence of CAG triplets, which when abnormally long (36 or more repetitions) produces a protein called huntingtin (Htt) with a gain of toxic function. The mutant Htt (mHtt) has a tendency to aggregate, eventually producing inclusion bodies in the cell. In addition, the htt gene generates other toxic products. For example, the RNA carrying these CAG repeats is toxic by itself. Moreover, it is known that rare peptides are produced that from a non-standard translation independent of ATG, Repeat-associated non-ATG (RAN) translation. When produced independently of ATG, the translation of this mRNA occurs in all 3 reading patterns. The objective is to generate a model of C. elegans worms that express some of these rare peptides, to verify toxicity, and to be able to investigate the mechanism of this test, in the future we will find substances that eliminate. For this, first, several expression vectors were constructed to model the toxicity due to peptides of polyserines and polyalanines. DNA constructs were obtained by different molecular biology techniques and using homologous recombination using the Gateway cloning system. Finally, it was possible to generate a construct encoding 158 polyalanines. With this construction, the transgenic animals were generated by microinjection, which is expressed with peptide with repeats of polyalanines throughout the nervous system. The expression of the messenger level (qPCR) was checked and an attempt was made to make a protein level (Western blot). Finally, it was confirmed by a test of behavior of worms that the expression of the construct with the polyamines is toxic for the nematode C. elegans. es_ES
dc.format.extent 55 es_ES
dc.language Español es_ES
dc.publisher Universitat Politècnica de València es_ES
dc.rights Reserva de todos los derechos es_ES
dc.subject Huntington's disease es_ES
dc.subject CAG expansions es_ES
dc.subject Polyserine es_ES
dc.subject Polyalanine es_ES
dc.subject Enfermedad de Huntington es_ES
dc.subject Caenorhabditis elegans es_ES
dc.subject Expansiones CAG es_ES
dc.subject RAN translation es_ES
dc.subject Poliserinas es_ES
dc.subject Polialaninas. es_ES
dc.subject Sistema Gateway es_ES
dc.subject Gateway system es_ES
dc.subject.classification BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR es_ES
dc.subject.other Grado en Biotecnología-Grau en Biotecnologia es_ES
dc.title Modelos de toxicidad por péptidos RAN con polialaninas y poliserinas en Caenorhabditis elegans es_ES
dc.type Proyecto/Trabajo fin de carrera/grado es_ES
dc.rights.accessRights Cerrado es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Departamento de Biotecnología - Departament de Biotecnologia es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural - Escola Tècnica Superior d'Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural es_ES
dc.description.bibliographicCitation Leiva Yuste, D. (2017). Modelos de toxicidad por péptidos RAN con polialaninas y poliserinas en Caenorhabditis elegans. http://hdl.handle.net/10251/89164. es_ES
dc.description.accrualMethod TFGM es_ES
dc.relation.pasarela TFGM\66543 es_ES


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